维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸,主要为还原型及脱氢型两种,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果,蔬菜,特别是枣,辣椒,苦瓜,柿子叶,猕猴桃,柑橘等食品中含量较多.它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂.维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶,熔点190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂.在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用).如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用.根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量.常用的测定方法有(1)2,6-二氯靛酚法(还原型VC)(2)2,4-二硝基苯肼法(总VC)(3)碘酸法(4)碘量法(5)荧光分光光度法一,2,6-二氯靛酚滴定法1,原理:还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失.还原型抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸.在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比.2,试剂⑴1%草酸溶液:称取10g草酸,加水至1000ml;⑵2%草酸溶液:称20g草酸,加水至1000ml;⑶维生素C标准液:准确称20mgVC溶于1%草酸中,并稀释至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC;⑷0.02%2,6-二氯靛酚溶液:称取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后,稀释至250ml,过滤于棕色瓶中,贮存于冰箱内,应用过程中每星期标定一次.标定一:吸标液(VC)5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001NKIO3标液滴定到淡兰色.计算:抗坏血酸浓度(mg/ml)=(V1×0.088)/V2V1-滴定时消耗0.001NKIO3标液的体积(ml)V2-维生素C重量(g)0.088-1ml0.001NKIO3标液≈维生素C的量(mg/ml)标定二:吸5ml已知浓度VC标液→加5ml1%草酸→用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色,在15秒不褪色为终点计算:每毫升2,6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度(T)T=(C×V1)/V2C-维生素C的浓度(mg/ml)V1-维生素C的体积(ml)V2-消耗2,6-二氯靛酚的体积(ml)⑸0.001NKIO3标液:吸0.1NKIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度,每毫升相当于VC0.008mg;⑹0.5%淀粉溶液;⑺6%KI溶液;3,操作方法⑴提取:称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土⑵滴定:吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色计算:VC(mg/100g)=(V×T)/W×100V-消耗染料体积(ml)T-1ml染料所能氧化维生素C的毫克数W-滴定时所有滤液中含有样品的克数4,注意事项⑴所有试剂的配制最好都用重蒸馏水;⑵滴定时,可同时吸二个样品.一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考;⑶样品进入实验室后,应浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,损失维生素C;⑷贮存过久的罐头食品,可能含有大量的低铁离子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸.这时如用草酸,低铁离子可以还原2,6-二氯靛酚,使测定数字增高,使用醋酸可以避免这种情况的发生;⑸整个操作过程中要迅速,避免还原型抗坏血酸被氧化;⑹在处理各种样品时,如遇有泡沫产生,可加入数滴辛醇消除;⑺测定样液时,需做空白对照,样液滴定体积扣除空白体积.二,2,4-二硝基苯肼法可测总抗坏血酸,总抗坏血酸包括还原型,脱氢型和二酮古乐糖酸型.此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,然后与2,4-二硝基苯肼作用,生成红色的脎.脎的量与总抗坏血酸含量成正比,将红色脎溶于硫酸后进行比色,由标准曲线计算样品中总VC.1,原理:用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,在继续氧化为二酮古乐糖酸.二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎,其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正比,可以比色定量.2,步骤⑴样品处理与分析称一定样→加等量2%草酸→于高速捣碎机捣碎→取匀浆20g→用1%草酸定容100ml→过滤→取滤液10ml→加1%草酸10ml→加少量活性炭→摇1分钟→静置过滤→各取滤液2ml于样品管和样品空白管→各管加入1滴硫脲溶液→于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5ml→分别于两个管加盖→于37℃保温箱3小时→取出后样品管放入冰水中→样品空白管取出后冷至室温→在样品空白管加入2,4-二硝基苯肼→0.5ml→样品管和空白管都于冰浴中→滴加85%H2SO42ml于各管中→边滴边摇→防止温度升高炭化后呈黑色→冰浴中30分钟后取出→室温下放置30分钟后,在540nm测消光值,从标准曲线上查出相应的含量⑵标准曲线的绘制取5个50ml容量瓶编号12345加VC标液0.2mg/ml1020304050ml取5个比色管取相应22222加硫脲溶液(滴)111112,4-二硝基苯肼(ml)0.50.50.50.50.5于37℃保温箱3~4小时,取出于冰浴中,然后滴加85%硫酸2.5ml→取出放30分钟→在540nm下测各消光值绘标准曲线,同时做空白.计算:每百克食品中抗坏血酸的毫克数=C/W*100
你好,维生素c的定量测定是用氧化还原法来实现,还可以用碘量法来实现。
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