一、目的与要求:1、掌握2.6-二氯酚靛酚测定维生毒C的原理和方法。二、原理:还原型抗坏血酸能还原染料2.6-二氯酚靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2.6-二氯酚靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2.6-二氯酚靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。三、试剂:(1)2%草酸溶液:溶解20克草酸结晶于200毫升水中,然后稀释至1000ml。(2)1%草酸溶液:取上述2%草酸溶液500ml,用水稀释至1000m1。(3)抗坏血酸标准溶液:准确称取20mg抗坏血酸,溶于1%草酸溶液中,移入lOml量瓶中,并用1%草酸溶液稀释至100毫升,混匀,置冰箱中保存。使用时吸取上述抗坏血酸5ml,置于50毫升容量瓶中,用1%草酸溶液定容之。此标准使用液每毫升含0.02mg维生素C。标定:吸取标准使用液5m1于三角烧瓶中,加入6%碘化钾溶液0.5ml,1%淀粉溶液3滴,再以0.001N碘酸钾标准溶液滴定,终点为淡蓝色。计算如下:抗坏血酸浓度(mg/ml)=(V1×0.088)/V2式中:V1——滴定时所耗0.001N碘酸钾标准溶液的量(ml)V2——所取抗坏血酸的量(ml)0.088——lmlO.0001N碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量(mg/m1)(4)2.6:二氯靛酚溶液:称取碳酸氢钠52mg,溶于200ml沸水中,然后称取2.6-二氯靛酚50mg,溶解在上述碳酸氢钠的溶液中,待冷,置于冰箱中过夜,次日过滤置于250ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。此液应贮于棕色瓶中并冷藏,每星期至少标定1次。标定方法:取5m1已知浓度的抗坏血酸标准溶液,加入1%草酸溶液5ml,摇匀,用上述配制的染料溶液滴定至溶液呈粉红色于15秒不褪色为止计算如下:每毫升染料溶液相当于Vc的毫克数=滴定度(T)=(C×V1)/V2式中:C——抗坏血酸(V)的浓度(mg/m1)Vl——抗坏血酸的量(m1)V2——消耗染料溶液量(m1)(5)0.1N碘酸钾溶液:精确取干燥的碘酸钾0.100ml。0.3567克用水稀释至100ml.(6)0.001N碘酸钾溶液:吸取0.1N碘酸钾溶液1ml,用水稀释至100毫升。此溶液1ml相当于抗坏血酸0.088mg。(7)1%淀粉溶液。(8)6%碘化钾溶液。四、操作方法:1、称取适量(50.0-100.0克)样品,加等量的2%草酸溶液,倒入组织捣碎机中捣成匀浆。称取10.00-30.00克浆状样品(使其含有抗坏血酸1-5mg),置于小烧杯中,用1%草酸溶液将样品移入100毫升容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀。2、将样液过滤,弃去最初毫升滤液。若样液具有颜色,用白陶土(应选择脱色力强但对抗坏血酸无损失的白陶土)去色,然后迅速吸取5-lOml滤液,置于50ml三角烧瓶中,用标定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉红色于15秒内不褪色为止。计算:每百克样品中抗坏血酸毫克数=(V.T)/W×100式中:V——滴定时所耗去染料溶液的量(ml);T——lml染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量(mg)W——滴定时所取的滤液中含样品量(g).五、说明:(1)所有试剂配制最好用重蒸馏水。(2)样品取样后,应浸泡在已知量2%草酸溶液中使抗坏血酸受损失。以免发生氧化,使抗坏血酸受损失。(3)对动性的样品可用10%三氯醋酸代替2%草酸溶液提取;对含有大量Fe的样品,如储藏过久的罐头食品可用8%醋酸
有关维生素C的测定方法如荧光法,2,6-二氯靛酚滴定法,2,4-二硝基苯肼法,光度分析法,化学发光法,电化学分析法及色谱法等具体的检查方法要看当地的医院的设备,有些检查方法是一般医院不具备这个条件的.
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