当备孕遇上验血首次阴性，二次检测的最佳时机受月经周期、排卵时间、检测方法、受精卵着床时间、个体激素水平差异等因素影响。
1. 月经周期：女性月经周期有长有短，一般规律月经周期为28 - 30天。若月经周期规律，可在月经推迟7 - 10天后进行二次检测。因为月经周期规律时，排卵和受孕时间相对固定，月经推迟可能是怀孕的信号，此时检测准确性相对较高。若月经周期不规律，不能单纯依靠月经推迟时间判断，需结合其他方法推测。
2. 排卵时间：正常情况下，女性排卵后卵子可存活1 - 2天，精子在女性生殖道内可存活2 - 3天。若能确定排卵时间，可在排卵后10 - 14天进行二次检测。因为受精卵着床一般发生在排卵后6 - 7天，着床后开始分泌人绒毛膜促性腺激素（hCG），再过几天血液中hCG水平可被检测到。
3. 检测方法：不同检测方法敏感度不同。血液检测hCG是较早且准确的检测怀孕的方法，一般在受孕后7 - 10天可检测到血液中hCG升高。若首次验血采用的是普通检测方法，可在首次检测后3 - 5天进行二次检测；若采用的是高敏感度检测方法，可适当延长间隔时间至5 - 7天。
4. 受精卵着床时间：受精卵着床时间因人而异，会影响hCG分泌时间和水平。有些女性受精卵着床较早，血液中hCG升高较快；有些女性受精卵着床较晚，hCG升高相对较慢。一般来说，可在预计受精卵着床后7 - 10天进行二次检测，以提高检测准确性。
5. 个体激素水平差异：不同女性体内激素水平变化不同，即使受孕时间相同，hCG升高速度和水平也可能存在差异。有些女性激素水平上升较快，较早就能检测出怀孕；有些女性激素水平上升较慢，需要更长时间才能检测到。因此，个体激素水平差异也是确定二次检测时机需要考虑的因素。
当备孕遇上验血首次阴性，二次检测的最佳时机需综合考虑月经周期、排卵时间、检测方法、受精卵着床时间和个体激素水平差异等因素。建议女性根据自身实际情况，合理选择二次检测时间。若对检测结果仍有疑问，可咨询专业医生获取更准确的建议。