一、阴道脱落细胞检查
是较常用的了解雌激素水平的方法，用棉棍浸生理盐水后取阴道上段侧壁的脱落细胞，涂在玻片上，固定和染色后，观察表，中，底各层细胞的百分比，表层细胞所占百分比越高，反映雌激素水平越高。
二、宫颈黏液
如发现闭经患者宫颈黏液为透明的，拉力好的稀薄黏液，涂在玻璃片上干燥后在显微镜下可见羊齿状结晶，表明该患者卵巢有分泌雌激素的功能。
三、药物性试验
这是临床上常用的对闭经诊断性试验，尤其是在缺乏激素测定的实验设备时，药物试验对估价卵巢功能及子宫内膜功能有重要帮助。
1、孕激素试验：对闭经患者应用黄体酮，肌注20mg/d，连续3～5天；或甲羟孕酮5～10mg/d，连服5～7天，停药后3～7天（一般最长不超过2周）出现撤药性出血者为试验阳性，提示：子宫内膜有功能，可排除子宫性闭经，卵巢有分泌雌激素的功能，子宫内膜受一定水平雌激素影响后才能对孕激素起反应而脱落出血，表明闭经不是缺乏雌激素，而是因各种无排卵所致孕激素缺乏；若孕激素试验阴性，即停药后无出血，提示以下几种可能：一是卵巢功能低下，没有适当的雌激素作用于子宫内膜；二是卵巢功能正常，但子宫内膜缺陷或受损，不能对雌激素发生反应，即不排除子宫性闭经；三是不排除妊娠。
2、雌激素试验：对孕激素试验阴性的闭经患者口服己烯雌酚1mg/d，或炔雌醇10μg/d，或相当生物效应的其他雌激素，连续20天，最后3～5天加黄体酮20mg/d，肌注，停药后3～7天观察有无撤退出血，若仍无出血，提示病变可能在子宫，即子宫性闭经，用上述试验有撤退出血者，说明子宫内膜对雌，孕激素的作用有反应，能发生正常的生长和脱落变化，闭经的原因应在卵巢或更高部位，应进一步测性激素水平来确诊。
四、性激素水平的测定
垂体激素的测定对诊断闭经的原因尤其有重要意义，闭经且雌激素低下的患者应进一步测定血FSH，LH和泌乳素（PRL）的水平，若FSH与LH升高，提示为卵巢性闭经；若FSH，LH低下，病因可能在垂体或下丘脑；FSH，LH相当于正常卵泡期水平，闭经是由于下丘脑分泌功能失调所致；若LH升高而FSH相对不足，多囊性卵巢综合征的诊断应当考虑；若PRL异常升高，闭经是由于高泌乳素血症所引起，应进一步检查高泌乳素血症的原因，特别应注意垂体瘤的可能。
当FSH，LH水平均低下时，垂体兴奋试验可进一步区别病变在垂体还是在下丘脑，垂体兴奋试验是将LHRH100μg溶于生理盐水5ml，静脉注入，30s内注完，于注射前和注射后15，30，60，120min取血测LH，若注射后30～60minLH值升至注射前3倍以上，提示垂体功能良好，对下丘脑激素LHRH反应正常，闭经的原因在丘脑下部或更高部位，若注射后，LH不增加或增加不明显，表明垂体缺乏反应，闭经的原因可能在垂体。
五、基础体温测定
可间接了解排卵功能（详见妇科内分泌检查方法），排卵后的黄体分泌孕酮，孕酮有升高体温的作用，正常月经周期中卵泡期体温比较平稳，一般波动在36.5℃以下，排卵后体温上升0.3～0.5℃，维持12～16天，在月经前1天或月经来潮当天下降至卵泡期水平，这种前半周期低而后半周期升高的基础体温称双相体温，一般提示有排卵或黄体形成，无此变化的体温称单相体温，表示无排卵，闭经患者基础体温多为单相，但子宫性闭经因其卵巢功能是正常的，因此，可表现有双相基础体温。
盆腔B超可协助诊断是否有先天性子宫缺如或畸形，鞍区的影像学检查可诊断是否有垂体瘤，诊断性刮宫，子宫碘油造影及内窥镜检查可了解宫腔及内膜情况，此外，若需除外其他内分泌异常或发育畸形时，还应检查其他有关腺体如甲状腺，肾上腺等的激素水平，生化，病理生理检查及染色体检查等。
