对于闭经患者，首先应了解自身体内雌激素水平，孕酮撤血试验是估计内源性雌激素水平较简单又快速的方法。如果孕酮未能引起撤药性出血，可能是由于内源性雌激素不足，此时应给予患者足够量的雌激素及孕激素，以观察停药后的出血情况，如仍无出血，提示子宫内膜有缺陷或已遭到破坏，称为子宫性闭经。
闭经诊断的四大步骤
1、估计内源性雌激素水平，以了解卵巢功能，对每一个闭经患者，首先应了解体内雌激素水平，可用下列几种试验作出估计，进行试验前至少在6周内未用过激素药物。
（1）孕酮撤血试验：此试验是估计内源性雌激素水平较简单又快速的方法，具体方法是：采用孕酮油剂20mg肌注，每日一次，连续5天；或口服醋甲孕酮，每日10mg，连服5 天，停药后2～7天，出现撤药性出血者为阳性，表示患者有功能性子宫内膜，且已受足够的雌激素影响，外源性孕酮使其产生分泌期变化，停药后内膜剥脱而导致出血，这种闭经称为I度闭经，估计闭经的病变部位在下丘脑垂体，从而引起排卵障碍，常见于青春期下丘脑-垂体-卵巢轴不成熟，多囊卵巢综合征以及高催乳素血症患者，撤药性出血量的多少与雌激素的水平高低有关，如仅有少量滴血，提示雌激素在临界水平，应引起重视。
（2）阴道脱落上皮细胞检查和宫颈粘液检查：阴道上皮和宫颈粘液都受卵巢激素影响而发生周期性变化，阴道脱落上皮细胞的核固缩及嗜伊红反应可反映体内雌激素水平，雌激素使宫颈粘液变稀薄，拉丝长，并出现羊齿状结晶，每周化验2～3次，连续一个月，可以了解雌激素水平高低，有无周期性变化。
2、雌激素撤血试验。如果孕酮（孕酮【译】：是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素，用来人工调整月经周期具有一定作用。）未能引起撤药性出血，可能是由于内源性雌激素不足，子宫内膜未受到足够雌激素的影响以致没有正常的增生期变化之故，在此种情况下虽给孕酮，并不能使子宫内膜呈分泌期变化而脱落；也可能是子宫内膜有缺陷，对 雌激素不起反应，雌激素试验的目的是给予患者足够量的雌激素及孕激素，以观察停药后的出血情况，具体方法是：口服乙烯雌酚，每日1mg， 连服20天；或炔雌醇，每日0.05mg， 连服20天，在服药的第16天开始，每日加孕酮20mg肌注，或口服甲孕酮每日10mg，连服5天，停药后2～7天有出血者为阳性反应，表示患者具有正常 功能的子宫内膜，对外源性雌，孕激素能作出反应，证明闭经是由于体内缺乏雌激素之故，称为Ⅱ度闭经，如果停药后没有撤药性出血，可重复一次雌激素试验，目的是促使子宫内膜产生雌激素受体，如仍无出血，提示子宫内膜有缺陷或已遭到破坏，称为子宫性闭经。
3、促性腺激素测定。对雌激素撤血试验阳性的患者，应寻找缺乏雌激素的原因，区别雌激素缺乏是由于卵巢已丧失分泌雌激素的能力，还是由于体内缺乏促性腺激素而卵巢不分泌甾体激素，故需测定促性腺激素，具体方法有两种：
（1）生物鉴定法：过去常用的是测定24h尿中促性腺激素（FSH和LH）含量，但由于主要是24h尿中FSH的排泄量有临床意义，故习称FSH测定，24h尿液FSH的排 泄量，经不同时间的2～3次测定均>52.8小白鼠子宫单位时，提示垂体功能亢进，闭经的原因在卵巢；如果24h尿FSH的排泄量<6.6小 白鼠子宫单位，提示垂体功能减退，闭经的原因在垂体或垂体以上的部位，但是，由于动物反应性的差异，以及尿的收集，提取，浓缩等步骤的误差，常影响本法的精确度，目前有条件的单位，均采用放射免疫法测定促性腺激素。
（2）放射免疫法：测定促卵泡激素（FSH）和黄体生成激素（LH）正常血清FSH值为5～40IU/L（mIU/ml）；正常血清LH值为 5～25IU/L，在月经周期中，排卵高峰值约为基值的3倍，经2～3次测定后可将结果分为增高，正常和降低三组，临床上，FSH增高的意义较大，如 FSH高于40IU/L，提示卵巢功能已衰竭，如LH低于5IU/L表示促性腺激素功能不足，若F、H和LH都降低，常提示垂体或更高中枢功能低落。
4、垂体兴奋试验。当FSH与LH均低落时，可进行垂体兴奋试验以了解病变在垂体，还是在下丘脑。具体方法是：将100μgLHRH溶于5ml生理盐水中，静脉注射，于30秒钟内注完，于注射前和注射后 15，30，60，120分钟各采血2ml，分离血清后，低温保存，用放射免疫法测定LH的含量，如果在注射后15～45分钟释出的LH值较注射前增高3 倍以上，说明垂体对外源性LHRH反应良好，其功能正常，闭经的病 原在下丘脑或以上部位，如果注射后LH值无增高或增高不多，则病原可能在垂体。
