临床上，有时通过病史和体检，即可发现闭经的病原线索，这时可根据病情需要，直接采用特种辅助诊断措施以明确诊断。常用的辅助诊断法如下：
（一）诊断性刮宫；
此法适用于已婚妇女。对疑有生殖道结核，或闭经发生在人工流产后的患者，经刮宫可以了解子宫腔的大小，宫颈或宫腔有无粘连。刮出的子宫内膜作病理切片检查，可间接了解性激素的分泌情况，以及诊断子宫内膜结核。
（二）子宫输卵管碘油造影；
有助于诊断生殖系统发育不良、宫腔粘连及生殖道结核等。
（三）外周血染色体检查；
对原发性闭经，应常规行外周血染色体检查，特别是身材矮小、发育迟缓、乳房不发育或外生殖器畸形者，更应检查染色体组型，以明确闭经的原因。
（四）蝶鞍多向断层摄片
主诉闭经合并泌乳的患者，应进行蝶鞍多向断层摄片。蝶鞍多向断层摄片可发现3～10mm大小的微型腺瘤，表现为蝶鞍前壁下方的一侧凸出与蝶鞍底板前方或后方侵蚀。
（五）腹腔镜检查；
可直接观察子宫、输卵管和卵巢的形态，并可作卵巢活组织检查，对诊断卵巢早衰或多囊卵巢综合征有帮助。
（六）甾体激素放射免疫法测定；
在闭经诊断的第一步骤中，要求对体内雌激素水平作出初步估计。用放射免疫法测定血中甾体激素可提供闭经病因的诊断，例如血E2很低，合并FSH异常增高时，提示卵巢功能衰竭；血睾酮增高常提示有多囊卵巢征群，或有分泌雄激素肿瘤存在的可能；含Y染色体的闭经患者，也可能有血睾酮增高现象。
（七）甲状腺功能测定；
考虑闭经与甲状腺功能异常有关时，应进行吸碘试验及T3、T4测定。有的高催乳素血症患者可能是由于原发性甲状腺功能减退所引起。
（八）肾上腺功能测定；
怀疑闭经与肾上腺功能异常有关时，可进行尿17-酮和17-羟测定。
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