血糖浓度的测定是诊断糖尿病最主要的依据。存在于血液中的糖主要是葡萄糖，通过静脉取血，分离血浆或血清，为了防止葡萄糖为红细胞所消耗，全血应在1h内将红细胞分离，并将血浆或血清存放在4℃以下，防止细胞消耗葡萄糖，尤其白细胞增多者，氟化钠具有抗凝作用，也可抑制葡萄糖酵解酶的活性，防止葡萄糖丢失。
血糖测定过去曾用过Folin-酚法、Benedict法等，其原理是利用葡萄糖的还原特性可将铜、铁试剂还原并呈色，通过光电比色仪，即可读数并与标准葡萄糖浓度相比较，从而求出血糖浓度，这种方法特异性低，可为血中一些还原物质如谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、抗坏血酸和其他己糖所干扰。
正常值为4.4-6.7mmol/L，数值偏高，不能代表真正的葡萄糖水平，故己被废除不用。磷甲苯胺法测定血糖值较还原法为低，如它比高铁氰化钾自动测定法低9%，较葡萄糖氧化酶测定结果稍高，故曾在国内普遍使用，现己为酶法所取代，如葡萄糖氧化酶、己糖激酶。
葡萄糖氧化酶法的缺点是血中尿酸、胆红素和维生素C可为过氧化酶所氧化，阻止呈色原的氧化和检测。高尿酸血症可使血糖浓度假性降低，见于氮质血症和尿毒症患者。磷甲苯胺呈色反应测定血糖是敏感和精确的，可手工操作，仍然被认可为好的检测方法。应用酶法（已糖激酶）测定血浆葡萄糖值较之采用铜还原法所测得的血浆葡萄糖值低约0.28mmol/L。
血糖测定也曾用试剂条目测比色，半定量估计血糖水平，它采用葡萄糖氧化酶方法，当血液覆盖试剂处，即会显色成蓝色。蓝色深浅程度即可反映血糖浓度，可与附上的色条板相比，求出大致血糖浓度，它可用于区别低血糖和高血糖状态，也可作为治疗效果的监测，然而目测毕竟比较粗糙，辨别不够精确，例如比色板上的色泽代表3.64mmol/L，实际上测得的血糖范围可在3.08-6.72mmol/L色泽代表7.28mmol/L者，实际测得的血糖值在6.72-11.2mmo比，因此不能为临床医师和患者所接受。
为了提高指头取毛细管全血测定血糖的正确性，现有多种血糖测定仪（glucometer），将一滴指血覆盖试剂片，随即自动计时，并读出血糖浓度，操作极为方便，提供的数据基本可信，适宜床边监测（急诊和门诊即刻测定）和家庭自我监测血糖。
血糖测定仪本身价格有限，但血糖试剂条价格较贵，且应妥善保存，并在规定的期限内使用。目前应用血糖仪自我血糖监测己为糖尿病患者所熟悉，对于严格控制高血糖，自我医疗保健，防止低血糖，医务人员与患者配合，防止并发症等，创造了良好的条件。