根据典型体征、X线片、心电图、超声心动图及心导管等检查可以确诊室间隔缺损。但需注意当本病合并有动脉导管末闭时，后者的杂音往往被室间隔缺损的响亮杂音所掩盖，而易于漏诊；或者室间隔缺损为肺动脉瓣下型缺损时，由于左至右分流的血液直接流入肺动脉，致肺动脉血氧含量高于右心室，易误诊为动脉导管未闭。故必要时可作升主动脉造影明确诊断。
1.X线检查
小型缺损心影多无改变，或只有轻度左心室增大或肺充血。中型缺损心影有不同程度增大，以左心室为主。大型缺损时心影中度或重度增大，以左心室为主或左、右心室及左心房均增大，肺动脉段若凸出明显，则提示肺动脉高压。主动脉结较小，缩小程度与分流量成反比。肺野充血，肺门血管影增宽，肺纹理增粗增多。若有器质性肺动脉高压则表现为肺门血管影虽增粗，但肺野外侧带反而清晰，肺血管阴影有突然中断现象（肺门截断现象），心影反比以前稍有缩小。
2、心电图
小型缺损，心电图可正常或表现为轻度左心室肥大。大型缺损，心电图变化随肺血管阻力大小而不同。①肺血管阻力正常，肺血流量增多时，心电图示左心室舒张期负荷加重，左心室肥大，如Vl呈rS形，Sv，波深，V5.6呈qRs形，Rv5.6波高大，Tvs高尖对称。②肺动脉中度高压，肺血流量明显增多时，心电图示双心室肥大，V3、V4的R波与S波均高大，V6示深Q波及大R波，TV5.6高尖对称或同时伴有Vl呈rsR'的右心室肥大图形。③肺动脉高压，肺血流量减少时，心电图示右心室肥厚，V1呈rsR’型，R’波极大，V5有深S波而RV6振幅较前降低，Tv1可能转为直立。
3、超声心动图
二维超声可直接显示缺损，有助于缺损大小及部位的诊断。多普勒超声由缺损右室面向缺损处和左室面追踪可探测到最大湍流。多普勒彩色血流显像可直接见到分流的位置、方向和区别分流的大小，其对肌部缺损及多发性缺损的诊断较为敏感。
4、心导管检查及心血管造影
右心室水平血氧含量高于右心房0.9%容积以上，小型缺损增高不明显。偶尔导管可通过缺损到达左心室。依分流量的多少，肺动脉或右心室压力有不同程度的增高。伴有右向左分流的患者，动脉血氧饱和度降低。肺动脉阻力显著高于正常值。对多发性窒间隔缺损或合并主动脉、主动脉弓等畸形的可作选择性左心室造影进一步肯定诊断。
