㈠弓形虫病病原检查方法有:
1、直接镜检 。取患者血液骨髓或脑脊液胸腹水痰液支气管肺泡灌洗液眼房水羊水等作涂片或淋巴结肌肉肝胎盘等活组织切片作瑞氏或姬氏染色镜检可找到滋养体或包囊但阳性率不高亦可作直接免疫荧光法检查组织内弓形虫
2、动物接种或组织培养 。取待检体液或组织悬液接种小白鼠腹腔内可产生感染并找到病原体第一代接种阴性时应盲目传代3次或作组织(猴肾或猪肾细胞)培养以分离鉴定弓形虫
3DNA杂交技术 国内学者首次应用32P标记含弓形虫特异DNA序列的探针与患者外周血内细胞或组织DNA进行分子杂交显示特异性杂交条带或斑点为阳性反应特异性和敏感性均高此外国内亦已建立多聚酶链反应诊断本病并与探针杂交动物接种和免疫学检查方法相比较显示春具高度特异敏感和快速等优点。
㈡免疫学检查
1、检测抗体 所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞质抗原)和胞膜抗原前者的抗体出现较早(用染色试验间接免疫荧光试验检测)而后者的抗体出现较晚(用间接血凝试验等检测)同时采用多种方法检测可起互补作用而提高检出率由于弓形虫在人体细胞内可长期存在故检测抗体一般难以区别现症感染或以往感染可根据抗体滴度的高低以及其动力学变化加以判断常用的检测方法有:
⑴染色试验:检测IgG抗体感染后1~2周出现阳性3~5周抗体效价达高峰以后逐渐下降可维持多年抗体效价1∶阳性提示为隐性感染;1∶256为活动性感染1∶1024为急性感染其缺点为此法简便但阳性率不高阴性者不能排除须进一步检查。
⑵间接血凝试验:试验方法简便与DT结果符合率高但一般在病后一个月左右出现阳性结果判断同IFAT重复性差和致敏红细胞不稳定与其缺点。
⑶间接荧光抗体试验:检测IgM和IgG抗体具灵敏特异快速重复性好等优点与DT基本一致但如有类风湿因子抗核抗体阳性时可引起假阳性反应血清抗体效价1∶64为既往感染余同DT。
⑷酶联免疫吸附试验:可检查IgM与IgG抗体并有灵每度高特异性强等优点也可用于抗原鉴定近年来在ELISA的基础上又创建衍生了多种新新的测定方法如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根过氧化物酶标记SPA取代酶标第二抗体进行ELISA检测(PPA-ELISA);亲和素-生物素(ABG)ELISA;凝胶扩散(DIG)-ELISA;斑点(DDT)-ELISA以及单克隆抗体(McAb)-ELISA等更灵敏更特异的方法。
⑸放射免疫试验:具有高度敏感性和特异性
检测抗原 系用免疫学方法检测宿主细胞内的病原(速殖子或包囊)在血清及体液中的代谢或裂解产物(循环抗原)是早期诊断和确诊的可靠方法国内外学者建立了McAb-ELISA以及McAb与多抗的夹心型ELISA法检测急性患者血清循环抗原其敏感度为能检出血清中04μg/ml的抗原。
㈢皮内试验 以受染小白鼠腹腔液或鸡胚液作抗原常出现延迟性结核菌素反应可用作流行病学调查目前应用不多。