器械名称: 血细胞DNA提取试剂盒(商品名：BaiO血细胞DNA提取试剂盒)

批准文号：沪食药监械(准)字2007第1400874号

厂商名称：上海百傲科技有限公司

器械类别：国产器械

功能类别：试剂盒

适用范围：适用于从0.1-0.5 ml 血液中提取基因组总DNA。疏水膜离心吸附柱可高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA可以用于下游酶切、PCR及qPCR等实验。

产品说明：本公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒，提取的DNA片段大、产量高、纯度好、稳定可靠，省时，避免使用苯酚、氯仿等有机溶剂特点。提取的DNA可用于PCR扩增、文库构建、Southern杂交、限制性酶切等分子生物学实验。1ml全血可提取约20~30ug的基因组DNA。

使用方法：一、小体积全血操作步骤如下： <400ul全血，以300ul血液处理量为例
1、向300ul抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，12000rpm离心1分钟，弃掉上清。
2、再重复步骤1一次，弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）。
4、加入150ul混合液，用移液器吹打均匀，60℃水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA，12000prm离心1分钟，弃掉上清。
6、加入800ul 75%酒精，颠倒数次；12000prm离心1分钟，用移液器吸掉上清，室温干燥10~15分钟。
7、加入150ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。
二、中量全血操作步骤如下： 1~10ml血量，以3ml血液处理量为例
1、向3ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，3000rpm离心5分钟，弃掉上清。
2、再重复步骤1一次，弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）。
4、加入1.5ml混合液，用1ml移液器或者一次性塑料吸管吹打均匀，60℃水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA。
6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，颠倒数次，12000prm离心3分钟，弃掉上清，室温干燥10~15分钟。
7、加入500ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。
三、大量全血操作步骤如下： 10~20ml血量，以10ml血液处理量为例
1、向10ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，8000rpm离心5分钟，弃掉上清；
2、再重复步骤1一次，弃掉上清。
3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）；
4、加入5ml混合液，用一次性塑料吸管吹打均匀，60°C水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。
5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA；
6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，颠倒数次，12000prm离心1分钟，弃掉上清，室温干燥10~15分钟；
7、加入1000ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器或一次性塑料吸管吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。

注意事项：1、冻存的全血避免在孵箱加热融化，否则会导致DNA产量下降，甚至提不出DNA；应在室温或者在4℃逐渐融化。
2、血液标本的保存及抗凝剂的选择：
（1）短期保存：-20℃可保存6个月；长期保存：-70℃可保存一年以上。
（2）抗凝剂的选择：推荐使用EDTA和ACD作为抗凝剂。不建议使用肝素抗凝，因提出的DNA中含有肝素，会影响后续的PCR扩增；再者冻存的肝素抗凝血，Elution buffer不容易溶解DNA。
3、推荐使用尖底塑料离心管（请勿使用10ml玻璃离心管，因离心力较大，容易破碎）；
4、所有的离心操作均可在室温下完成。
5、需要操作者提供异丙醇、75%酒精。
6、提取的基因组DNA分光光度计测定260/280比值在1.7~2.0左右。

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