| 器械名称 | 湘雅 人体外周血淋巴细胞培养基 | 胱抑素C测定试剂盒(胶乳增强免疫透射比浊法) |
| 器械分类 | 国产器械 | 国产器械 |
| 规格型号 | 5ml | YZB/鄂0935－2011 |
| 产家 | 湖南湘雅基因技术有限公司 | 武汉生之源生物科技有限公司 |
| 适用范围 | 供医疗机构用于人体外周血淋巴细胞的体外培养。 | 本品用于定量测定血清或血浆中胱抑素C的含量。 |
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| 产品说明 | 产品由RPMI-1640、血清、抗菌素、淋巴细胞刺激因子等组成，培养基清凉呈粉红色，不混浊。 | 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 Cystatin C 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 Cystatin C与单抗结合，加入生物素化的抗人Cystatin C，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，Cystatin C浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Cystatin C浓度。 试剂盒组成(2-8℃保存) 酶标板(Coated Wells) 96孔 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) 12ml 10×标本稀释液(Sample Buffer) 12ml 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) 50ml 标准品(Standards)：120ng/瓶 2瓶 底物工作液(TMB Solution) 12ml 第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) 12ml 终止液(Stop Solution) 12ml 准备试剂与收集血样 1. 收集标本：血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液等尽早检测，2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反复冻融。尿液、唾液、支气管液、细胞培养上清1：5倍稀释。血清、血浆1：20倍稀释。 2. 标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成400ng/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入400ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。 3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。 4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释(示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水) |
| 用途 | 供医疗机构用于人体外周血淋巴细胞的体外培养。 | 本品用于定量测定血清或血浆中胱抑素C的含量。 |
| 结构及其组成 | 产品由RPMI-1640、血清、抗菌素、淋巴细胞刺激因子等组成，培养基清凉呈粉红色，不混浊。 | R1 :检测试剂1Tris缓冲液R2 :检测试剂2抗人胱抑素C多克隆抗体胶乳颗粒悬浊液胱抑素C校准液(1ml×5) |
| 使用方法 | 在酒精灯旁直接把采集到的外周血0.2—0.4mL接种到每瓶培养基内，注意摇匀，置37℃培养68或69小时，用7#针头每瓶加2—3滴秋水仙素（20微克/毫升）摇匀，继续培养3小时左右，即可制片。1．采血：用10:2肝素（10％）温润无菌注射器抽取外周血2ml（注意：消毒时需脱碘）。 2．种血：将注射器搓捏，使血样混匀，在无菌条件下，用7#针头垂直种血28-32滴（一般成年男子28滴，成年女子30滴，儿童32滴左右）至外周血培养基内。 3．培养：将培养瓶放入37℃恒温箱中培养68-72小时，培养期间注意观察培养液有无凝血、溶血或长菌的现象，可每天将培养液摇一摇，以便细胞可获得充分的营养，一般情况下可不摇。 4．制片： 加秋：在培养完成前2-3小时，加入浓度为20ug/ml的秋水仙素2-3小滴（7#针头竖滴）后，继续培养2-3小时。 离心：将培养液用吸管吸至离心管中（10ml离心管）2000转/分×10分钟，弃上清,留沉淀。 低渗：加入已预温至37℃的0.075mol/L 氯hua钾溶液约8ml，用吸管充分打匀，放入37℃水浴箱中，温育30分钟。 预固定：向离心管中加入现配的预温至37℃的甲醇、冰醋酸固定液（3:1）1ml左右，轻轻混匀， 置室温下5分钟，2000转/分×10分钟，弃上清,留沉淀。 固定：沿管壁缓慢加入现配的预温至37℃的新配固定液约8ml，轻轻混匀，然后2000转/分离心10分钟。加入固定液再次固定。 弃上清，用固定液将沉淀调成细胞悬液（不宜太浓，一般加固定液至0.5ml）在冰片上滴片，每张片上滴2滴。 烤片：立即放入75℃烤箱中烤片3小时。 5．显带：先将玻片放在预温至37℃的0.25％胰酶溶液中（PH＝7.2-7.4）消化1分左右，每次作用时间并不完全相同。可先试一张片子，再根据显带效果调整胰酶作用时间，再放在预温至37℃的0.75％Nacl溶液中漂洗两次，在预温至37℃的Giemsa溶液中染色10分钟，自来水冲洗干净，用吹风机吹干后，即可阅片。 |
准备试剂与收集血样 1. 收集标本：血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆、尿液等尽早检测，2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反复冻融。尿液、唾液、支气管液、细胞培养上清1：5倍稀释。血清、血浆1：20倍稀释。 2. 标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成400ng/ml的溶液。设标准管8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入400ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照。 3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。 4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释(示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水) 检测程序 1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。 4. 洗板：同前。 5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。 6. 洗板：同前。 7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。 8. 每孔加入100ul终止液混匀。 9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 |
| 产品特点 | 1. 灵敏度：最小的Cystatin C 检测浓度小于1.5ng/ml。 2. 特异性：可同时检测重组或天然的人Cystatin C。不与人其它细胞因子有交叉反应。 3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10.6%。 |
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| 注意事项 | 1、采集的外周血若立即接种则无需加肝素抗凝，如需保存标本，应加肝素抗凝。 2、采集的外周血在冰箱4℃保存，保存期不能超过一周。 |
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断! |
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