器械名称 | 血细胞DNA提取试剂盒(商品名:BaiO血细胞DNA提取试剂盒) | 5'-核苷酸酶(5'-NT)测定试剂盒(酶比色法) |
器械分类 | 国产器械 | 国产器械 |
规格型号 | YZB/鄂0965-2011 | |
产家 | 上海百傲科技有限公司 | 武汉市长立生物技术有限责任公司 |
适用范围 | 适用于从0.1-0.5 ml 血液中提取基因组总DNA。疏水膜离心吸附柱可高效、专一吸附DNA,最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA可以用于下游酶切、PCR及qPCR等实验。 | 适用于半/全自动生化分析仪,如:日立系列、贝克曼系列、奥林巴斯系列、迈瑞系列、东芝系列、雅培系列等自动生化分析仪。 |
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产品说明 | 本公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒,提取的DNA片段大、产量高、纯度好、稳定可靠,省时,避免使用苯酚、氯仿等有机溶剂特点。提取的DNA可用于PCR扩增、文库构建、Southern杂交、限制性酶切等分子生物学实验。1ml全血可提取约20~30ug的基因组DNA。 | 【预期用途】 5’-核糖核苷酸水解酶诊断试剂盒临床上用于检测血清中5’-核糖核苷酸水解酶的活性。 |
用途 | 5'-NT测定主要用于肝胆系统疾病的诊断和骨骼疾病的鉴别诊断。血清5'-NT活性升高主要见于肝胆系统疾病,如阻塞性黄疸、肝癌、肝炎等,其活性变化与ALP一致 | |
结构及其组成 | ||
使用方法 | 一、小体积全血操作步骤如下: <400ul全血,以300ul血液处理量为例 1、向300ul抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,12000rpm离心1分钟,弃掉上清。 2、再重复步骤1一次,弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表)。 4、加入150ul混合液,用移液器吹打均匀,60℃水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA,12000prm离心1分钟,弃掉上清。 6、加入800ul 75%酒精,颠倒数次;12000prm离心1分钟,用移液器吸掉上清,室温干燥10~15分钟。 7、加入150ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。 二、中量全血操作步骤如下: 1~10ml血量,以3ml血液处理量为例 1、向3ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,3000rpm离心5分钟,弃掉上清。 2、再重复步骤1一次,弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表)。 4、加入1.5ml混合液,用1ml移液器或者一次性塑料吸管吹打均匀,60℃水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA。 6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中,颠倒数次,12000prm离心3分钟,弃掉上清,室温干燥10~15分钟。 7、加入500ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。 三、大量全血操作步骤如下: 10~20ml血量,以10ml血液处理量为例 1、向10ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A,颠倒混匀,8000rpm离心5分钟,弃掉上清; 2、再重复步骤1一次,弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液(Solution B与Solution C的使用量见附表); 4、加入5ml混合液,用一次性塑料吸管吹打均匀,60°C水浴或孵箱孵育10分钟,孵育期间颠倒混匀一次,溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇,充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA; 6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中,颠倒数次,12000prm离心1分钟,弃掉上清,室温干燥10~15分钟; 7、加入1000ul Elution buffer,60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA,用移液器或一次性塑料吸管吹打均匀,-20℃保存基因组DNA。 |
【样本要求】 1.血清或肝素抗凝血浆。 2.5’-NT活性4℃条件下可稳定一周。 【检验方法】 过氧化物酶法 |
产品特点 | 5’-NT广泛存在于肝脏和各种组织中,5’-NT活性增高主要见于肝胆系统疾病,如阻塞性黄疸、原发及继发性肝癌等,通常其活性变化与ALP的活性变化平行,但在骨骼系统的疾病,通常ALP的活性增高,而5’-NT活性正常。所以,对ALP活性增高的患者,测定5’-NT有助于临床判断ALP活性增高是肝胆系统疾病还是骨骼系统疾病所引起的。 |
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注意事项 | 1、冻存的全血避免在孵箱加热融化,否则会导致DNA产量下降,甚至提不出DNA;应在室温或者在4℃逐渐融化。 2、血液标本的保存及抗凝剂的选择: (1)短期保存:-20℃可保存6个月;长期保存:-70℃可保存一年以上。 (2)抗凝剂的选择:推荐使用EDTA和ACD作为抗凝剂。不建议使用肝素抗凝,因提出的DNA中含有肝素,会影响后续的PCR扩增;再者冻存的肝素抗凝血,Elution buffer不容易溶解DNA。 3、推荐使用尖底塑料离心管(请勿使用10ml玻璃离心管,因离心力较大,容易破碎); 4、所有的离心操作均可在室温下完成。 5、需要操作者提供异丙醇、75%酒精。 6、提取的基因组DNA分光光度计测定260/280比值在1.7~2.0左右。 |
1.样本:R1:R2用量之比为1:36:18,样本量可根据需要适当调整。 2.建议各实验室建立自己的参考值范围。 3.试剂含有叠氮钠,避免沾到皮肤和黏膜组织上。如果不小心被溅到,请立即用清水冲洗,必要时请到医院就诊。 4.叠氮钠可以和铜、铅等金属发生强烈的反应生成叠氮化金属,故废弃时请充分稀释废液和冲洗排水管,以免在排水管中残留。 |
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