【使用目的】

　　用于血清或肝素抗凝血浆样品中肿瘤相关抗原125(CA125)的定量测定。

　　肿瘤相关抗原125(CA125)是重要的肿瘤标志物之一，属高分子糖蛋白复合物，分子量200-1000kD。CA125主要存在于胚胎发育的体腔上皮细胞及苗勒氏管中，于出生后消失。当这些器官发生病变时血清CA125相应升高，尤其以卵巢癌变时升高为显著。正常人血清CA125含量小于35U/ml。血清CA125含量的改变与癌症分期密切相关，患者手术前后CA125含量的变化也十分明显。因此，血清CA125检测对卵巢癌的辅助诊断、治疗监测和预后判断等有重要意义。

　　【试验方法】

　　1.准备：自2-8℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟;浓缩清洗液用用煮沸并预冷的纯化水按1:20稀释成工作液。

　　2.加样品、校准品、质控物及抗CA125-ALP标记物：待测样品、校准品及质控物分别定位于微孔条板。待测样品、校准品系列及质控物Q1、Q2每孔加20ul，然后各孔加入抗CA125-ALP标记物80ul，混匀。

　　3.温育：置37℃恒温反应60分钟。

　　3.洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入洗液约300ul，静置20秒左右，除去其中液体。如此共洗5次,最后一遍将板中液体拍尽。

　　4.加发光底物液：开启发光测定仪及主控制计算机,预热15分钟。设定测定模式与参数。将微孔板置发光测定仪测定室，用内置加样器加发光底物液，每孔50ul。详见发光测定仪操作指南。

　　5.测定RLU：于室温25℃左右,设定每孔测定1秒钟。在加发光底物液后的第10-20分钟测定各孔的发光值RLU。并将数据转至定量软件。

　　6.定量方法:根据各校准品测定的RLU，用Cubic Spline方程建立CA125浓度—RLU的回归方程和绘制校准曲线。根据各样品RLU值，由定量软件直接计算转换成其相应的CA125浓度。存入CA125文档，再输入至病人的检测报告单。

　　【注意事项】

　　1.检测结果的质量控制

　　1.1平行检测质控物Q1、Q2，结果应在Q1：12.43～17.99U/ml，Q2：177.0～230.94U/ml范围内;

　　1.2校准品曲线(5-500U/ml范围内)线性相关系数r≥0.9900;

　　1.3校准品发光值递进比

　　CA125 CLIA试剂校准品发光值递进比及其99%可信区间

　　剂量组(U/ml) RLU比值99%可信限区间

　　500/150 2.63-3.82

　　150/50 2.77-3.53

　　50/25 4.07-6.37

　　25/5 4.17-6.17

　　5/0 3.43-15.28

　　各剂量组发光值递进比应在此99%可信区间范围内。

　　如不同时符合上述条件，该试验无效。

　　2.本品仅供体外诊断用;

　　3.试剂启用后应尽快用完，不同批号试剂组分请勿混用。用时请将瓶内容物混匀;

　　4.免疫反应过程中，务必保持温度恒定准确，控制于37℃;

　　5.稀释浓缩洗液的纯化水，用前必须煮沸并冷却以灭活其中的细菌磷酸酶;

　　6.洗板机洗板，每孔注液约300ul，洗板5次，浸泡20秒左右，并检查加液头是否堵塞;

　　7.手工洗板，勿用带纸屑的吸水材料，防止磷酸酶与底物发生反应，影响检测结果的准确性;

　　8.加发光底物的加样器吸量应准确，加样器头应经过高压灭菌，并干燥保存。在加发光底物的过程中应避免加样器吸头与板孔或手指接触，以防止底物受到污染;

　　9.用发光测定仪自动进样器加发光底物时,每天应用空白废弃条一孔检测加样体积是否为设定的50ul,如不够,应该使用Prime功能排气,确保加样体积准确;

　　10.发光测定仪完成加发光底物模式后,应立即将模式设定为读RLU模式,以防止重复加发光底物液;

　　11.临床标本均应视为有潜在传染性，请按传染疾病实验室检查规程操作;

　　12.每个实验室在长期实践中应建立本方法自己的正常值范围。