你好,如果用普通PCR检测不到条带是因为扩增模板量太低造成的,为了提高检测灵敏度和特异性,可以采用巢式PCR。其优点是:1、克服了单次扩增“平台期效应”的限制,使扩增倍数提高,从而极大的提高了PCR的敏感性;2、由于模板和引物的改变,降低了非特异性反应连续放大进行的可能性,保证了反应的特异性;3、内侧引物扩增的模板是外侧引物扩增的产物,第二阶段反应能否进行,也是对第一阶段反应正确性的鉴定,因引可以保证整个反应的准确性及可行性。但其亦有缺点:进行第二次PCR坟增引起交叉污染的几率大。为了克服此缺点,可彩用同一反应管中巢式PCR,主要利用内外引物Tm值不同。如果你已排除引物,酶,RNA提取,逆转录等等其他原因引起的PCR不成功,确定关键原因是模板量低的话,可以用巢式。但还是建议先排除一下其他可能因素,毕竟普通PCR简单。
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杨汉勤 主任医师 中国人民解放军南部战区总医院
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叶长生 主任医师 南方医科大学南方医院
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邓爱民 副主任医师 中国人民解放军南部战区总医院
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冉建民 主任医师 广州市红十字会医院
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冉建民 主任医师 广州市红十字会医院
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王向宇 主任医师 暨南大学附属第一医院