幽门螺杆菌(Hp)是一种革兰氏阴性微需氧菌,一般定植在胃黏膜上皮细胞表面,产生高活性的尿素酶。尿素酶一方面直接损伤胃黏膜,另一方面分解尿素产生NH3,以保护Hp免受胃酸和胃蛋白酶的侵袭,而利用Hp的定植和生存。
幽门螺杆菌感染的检查方法:
1、细菌培养 直接将胃黏膜标本划种到固体培养基上或将胃黏膜标本研磨成匀浆后接种,置微氧条件下,相对湿度90%以上,37℃孵育48~72h后观察结果,至少依据涂片染色镜检,尿素酶,过氧化氢酶及氧化酶鉴定。
2、胃活检黏膜涂片 将活检黏膜面直接涂抹于清洁玻片上,自然干燥后革兰染色或复红染色,油镜观察。
3、组织切片染色 胃黏膜活检标本(宜多点取材)垂直包埋切片,采用Warthin-Starry和Centa银染色或HE染色,Giem sa染色,荧光素吖啶橙染色,米帕林染色以及无标记抗体PAP染色等在油镜下或荧光显微镜下观察。
4、尿素酶试验 Hp具高度尿素酶活性,能分解尿素产生NH+4,通过测NH+4存在与否,间接判断有否Hp感染,有pH指示剂法,分析化学法和同位素标记尿素试验等方法。
5、4C尿素呼气试验 给患者口服14C尿素,如有Hp感染,20min后患者呼出的气体中有14CO2,无Hp感染则无14CO2呼出,此试验安全,准确,重复性好,但因设备等原因不易推广应用。
6、血清学检查 应用ELISA方法检测血清或唾液中的抗Hp IgG或抗Hp IgA,为特异性和敏感性指标。
7、聚合酶链反应(PCR)技术 可检测胃液,胃黏膜,唾液中Hp,阳性率高于尿素酶法。
8、原位鉴定 可应用单克隆抗体进行免疫组织化学检测,Hp特异探针或引物进行原位杂交及PCR检测。
组织切片染色:胃黏膜活检标本(宜多点取材)垂直包埋切片,采用Warthin-Starry和centa银染色或HE染色,Giemsa染色,荧光素吖啶橙染色,米帕林染色以及无标记抗体PAP染色等在油镜下或荧光显微镜下观察。
幽门螺杆菌(Hp)感染诊断方法:
Hp感染的诊断有多种较为可靠的方法,可从检测原理、检测意义以及对人体有无创伤等多角度进行各种不同分类。一般依据对人体有无创伤分为侵入性和非侵入性诊断方法。侵入性诊断方法主要是依赖胃镜活检的方法,包括:快速尿素酶试验(RUT)、胃黏膜直接涂片革兰染色镜检、胃黏膜组织切片染色镜检、Hp培养、Hp基因检测方法(如PCR、寡核苷酸探针杂交等);但活检钳消毒不严格可造成交叉污染。
而非侵入性检测方法主要是指不需要内镜检查的方法,主要包括:13C或14C 尿素呼气试验(UBT)、15N尿氨排泄试验、粪便Hp抗原检测、Hp抗体检测;该类方法无创,病人依从性好。