你好,内翻型乳头状瘤的移行上皮或鳞状上皮增生的乳头不向外生长,而向上皮间质内翻,呈波状下陷,分枝状生长,形成大小不等的隐窝或实体细胞团块,上皮细胞之间有大量含糖原空泡细胞和小粘液囊肿,上皮与间质隔有完整的基底膜。
(一)组织DNA的提取:采用蛋白酶K消化,酚/氯仿异戊醇抽提,乙醇沉淀法。100mg新鲜组织,0℃条件下5mL匀浆缓冲液(100mmol/LTrils,10mmol/LEDTA,pH7.4)中制备组织匀浆,然后加入等体积消化缓冲液(20mmol/LNaCl,20mmol/LTrils,20mmol/LEDTA,pH7.4,含200μg蛋白酶K/mL和0.2%SDS),置37℃水浴消化3h,然后加入等体积的水饱和酚的1/2体积氯仿异戊醇(2.4∶1)抽提2次,再用等体积的氯仿异戊醇提取1次,抽水相,无水乙醇沉淀后置于TE液体中。 (二)C-mycDNA探针的制备:扩增克隆转化菌,大量制备重组质粒,内切酶消化,凝胶电泳分离DNA片段,纯化后经缺口转化法,用[α-32P]dATP标记。 (三)DotblotDNA杂交:参照ConradG杂交法[1],每份标本DNA取3μg,依次以15倍稀释成5个浓度,分别点膜。对照组采用全基因质粒,取1μg依次以15倍稀释成5个浓度点膜,室温风干,80℃烤2h。将已结合DNA的硝酸纤维放入可封口的耐热塑料袋中进行预杂交、杂交、放射自显影和激光扫描。结果 B1-B7,C1-C5,D1-D5,E5,E7,F7,G2-G5共24例为鼻腔鼻窦鳞癌的标本,属c-myc高倍扩增组,扩增倍数为10~40倍;A6,A7,C6,C7,E1-E4,E6,F5-F6,G1,G6,G7共15例为鼻腔鼻窦良性肿瘤组,扩增倍数10倍以下。其中8例鼻内翻性乳头状瘤(临床上属癌前期病变)c-myc的扩增倍数为5~10倍。鼻腔血管瘤和上颌窦囊肿的c-myc扩增倍数为5倍以下。D6,F1-F4共5例为鼻腔正常组织的扩增倍数为5倍以下。见图1,2。
你好,内翻性乳头状瘤是鼻腔鼻窦常见的良性肿瘤之。该病属于乳头状瘤的一种,约占鼻腔鼻窦乳头状瘤的70%,约占全部鼻腔鼻窦肿瘤的0.5%-4%。内翻性乳头状瘤虽是一种良性肿瘤,但其特有的术后复发及恶变倾向使得该病拥有区别于其他鼻腔鼻窦良性肿瘤的鲜明特征。
(一)组织DNA的提取:采用蛋白酶K消化,酚/氯仿异戊醇抽提,乙醇沉淀法。100mg新鲜组织,0℃条件下5mL匀浆缓冲液(100mmol/LTrils,10mmol/LEDTA,pH7.4)中制备组织匀浆,然后加入等体积消化缓冲液(20mmol/LNaCl,20mmol/LTrils,20mmol/LEDTA,pH7.4,含200μg蛋白酶K/mL和0.2%SDS),置37℃水浴消化3h,然后加入等体积的水饱和酚的1/2体积氯仿异戊醇(2.4∶1)抽提2次,再用等体积的氯仿异戊醇提取1次,抽水相,无水乙醇沉淀后置于TE液体中。 (二)C-mycDNA探针的制备:扩增克隆转化菌,大量制备重组质粒,内切酶消化,凝胶电泳分离DNA片段,纯化后经缺口转化法,用[α-32P]dATP标记。 (三)DotblotDNA杂交:参照ConradG杂交法[1],每份标本DNA取3μg,依次以15倍稀释成5个浓度,分别点膜。对照组采用全基因质粒,取1μg依次以15倍稀释成5个浓度点膜,室温风干,80℃烤2h。将已结合DNA的硝酸纤维放入可封口的耐热塑料袋中进行预杂交、杂交、放射自显影和激光扫描。结果 B1-B7,C1-C5,D1-D5,E5,E7,F7,G2-G5共24例为鼻腔鼻窦鳞癌的标本,属c-myc高倍扩增组,扩增倍数为10~40倍;A6,A7,C6,C7,E1-E4,E6,F5-F6,G1,G6,G7共15例为鼻腔鼻窦良性肿瘤组,扩增倍数10倍以下。其中8例鼻内翻性乳头状瘤(临床上属癌前期病变)c-myc的扩增倍数为5~10倍。鼻腔血管瘤和上颌窦囊肿的c-myc扩增倍数为5倍以下。D6,F1-F4共5例为鼻腔正常组织的扩增倍数为5倍以下。
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