湿疣

您好，手上也可以出现疣，但不一定是尖锐湿疣，但都跟乳头瘤病毒有关，子宫里的也是可以看到的。

您好：潜伏期3周到8个月，平均3个月，多见于性活跃的青、中年男女，发病高峰年龄为20-25岁，病程平均在3-5个月的男女患者，在性接触后不久即发病，而病程平均12个月的男性患者，其性接触者可不发病。多数患者一般无症状。损害大小及形状不等。可仅为数个，亦可为多数针头样大的损害：在阴肛部可长成大的肿瘤样物，有压迫感；有恶臭味；有时小的湿疣可出现阴部痛痒不适，病人可出现尿血和排尿困难；直肠内尖锐湿疣可发生疼痛、便血，而直肠内大的湿疣则可引起里急后重感。男性患者好发于包皮系带、冠状沟、包皮、尿道、阴茎、肛门周围和阴囊。病初为淡红或污红色粟状大小赘生物，性质柔软，顶端稍尖，逐渐长大或增多。可发展成乳头状或囊状，基底稍宽或有带，表面有颗粒。在肛门部常增大，状如菜花，表面湿润或有出血，在颗粒间常积存有脓液，散发恶臭气味，搔抓后可继发感染。位于湿度较低干燥部位的生殖器疣，损害常小而呈扁平疣状。位于湿热湿润部位的疣常表现为丝状或乳头瘤状，易融合成大的团块。有严重肝病的患者湿疣可增大。妊娠可使湿疣复发或生长加快。亚临床感染是指临床上肉眼不能辨认的病变，但用3%-5%醋酸液局部外涂或湿敷5-10分钟可在HPV感染区域发白，即所谓“醋酸白现象”。HPV感染和肿瘤的发生：（一）HPV与皮肤肿瘤的发生有关它在皮肤癌和其他解剖部位的肿瘤似乎起决定作用。口腔良性赘生物和癌前病变，皮肤鳞状细胞癌组织中可发现HPV-11、16、18型DNA，曾报道喉部HPV-6乳头瘤恶变成喉癌，皮肤疣状表皮发育不良（EV）是HPV潜在致癌作用的证据，EV皮损中发现多种HPV型DNA，并在患者皮肤鳞状细胞癌中检出HPV-5、8、14、17及20型，皮肤鳞状细胞癌似乎是由先已存在的病毒性损害恶变而来。（二）尖锐湿疣与肛门生殖器癌生殖器癌与HPV类型有一定的关系。利用DNA杂交技术发现生殖器癌组织中存在HPV-6、11、16、18型等。
1．宫颈癌：根据HPV与宫颈癌的关系，可将其分为两大类型：低危型主要指HPV-6、11型，高危型是指HPV-16、18型，Gissmann等观察到在侵袭性宫颈癌中，有57.4%患者存在着HPV-16、18型，其他学者也有相同发现。还有人从侵袭性宫颈癌中分离出HPV-33和35型。
2．皮肤鳞状细胞癌（SCC）：HPV感染而发生的CA也可能是癌前损害，并可发展成肛门生殖器SCC，这表明HPV是女阴、阴茎及肛门生殖器SCC的重要因素。CA，巨大CA和疣状SCC组成一个生殖器癌前病变和癌的损害病谱，有些部位生殖器癌病例在其周围皮肤有CA存在，有时肉眼见为典型的CA，但组织学检查中发现SCC的孤立病灶。
3．鲍温样丘疹病：常见于阴茎、女阴或肛门周围，曾在皮损内发现HPV-16型DNA。实验室检查一、醋酸白试验用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。二、免疫组织学检查常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP），显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。三、组织化学检查取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。四、病理检查主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。五、基因诊断迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。（一）标本的采集及处理1．标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
2．标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，
0.4%SDS，
1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(
1：1)，氯仿/异戊醇
（24：1）各抽提2次；加1/10体积3mol/LNaAc（pH5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育30min。（二）PCR扩增1．引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。Manos等设计的HPVL1通用引物MY11：GCMCAGGGWCATAAYAATGGMY09：CGTCCMARRGGAWACTGATC表1HPV型MY11的第1个硷基位置MY09的第1个硷基位置PCR产物长度（bp）6672271704481167077155448166584703545118655870124543365396987448M=A+C，R=A+G，W=A+T，Y=C+T表2列述了Manos等设计的寡核苷酸探针。公用混合探针序列选自HPVL1区中另一保守序列，可与MY11和MY09引物产生的多种HPVL1PCR扩增产物杂交：型特异探针只与相应HPV型有互补序列，用于检出的HPV分型。表2Manos等设计的HPVL1PCR产物探针公用混合探针GP1CTGTTGTTGATACTACACGCAGTACGP2CTGTGGTAGATACCACWCGCAGTAC第一个硷基位置HPV66771HPV116757HPV166631HPV186607HPV336588型特异探针探针HPV型序列基因位置MY12HPV6CATCCGTAACTACATCTTCCA6813—6833MY13HPV11TCTGTGTCTAAATCTGCTACA6800—6820MY14HPV16CATACACCTCCAGCACCTAA6926—6945MY74HPV18GGATGCTGCACCGGTCTGA6905—6922MY16HPV33CACACAAGTAACTAGCTACAG6628—6648H=A+C+T，R=A+G，W=A+T，Y=C+T2．PCR反应试剂：TaqDNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/LdNTP贮备液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5)，100μmol/LMY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3．PCR扩增方法和程序：以100μlPCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
（1）实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂见表3。表3每支反应管中的PCR反应试剂反应试剂体积（μl）终浓度10×PCR缓冲液101×PCR缓冲液dNTP贮备液2200μmol/L每种dNTPMY11贮备液0.5500μmol/LMY09贮备液0.5500μmol/LTaqDNA聚合酶0.52.5μ灭菌蒸馏水75.5总计90（2）各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
（3）加入80-100μl石蜡油，在台式离心机上快速离心数秒钟，使各反应试剂收集于油层下。目前，PCR试剂已商品化，反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
（4）将反应管置PCR扩增仪上，循环参数为95℃30s，55℃40s，72℃50s循环35次，最后72℃延伸5min。
4．每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒（每反应为100pg）或含有HPV的细胞系（如Caski、HeLa）DNA为阳性对照，以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。（三）扩增产物的检测和分析1．凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
2．核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时，可用标记的公用混合探针和（或）型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。按照标准方法制32PATP标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液（2×SSC、
0.1%SDS）迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。
然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min；MY12、MY13及MY16探针，56-57℃下10min，并换液重洗1次；MY14及WD74探针，58-59℃下10min，亦换液重洗1次。用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果，可检出标本中200个拷贝的HPVDNA，若以核酸杂交检测PCR产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的HPVDNA。鉴于PCR技术的高度敏感性，以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求，避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下，PCR扩增产物经凝胶电泳，观察产生的DNA可直接作出诊断。因此，PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。