| 器械名称 | 血细胞DNA提取试剂盒(商品名：BaiO血细胞DNA提取试剂盒) | 乳酸脱氢酶测定试剂盒(IFCC法) |
| 器械分类 | 国产器械 | 国产器械 |
| 规格型号 | YZB/鄂0946－2011 | |
| 产家 | 上海百傲科技有限公司 | 武汉生之源生物科技有限公司 |
| 适用范围 | 适用于从0.1-0.5 ml 血液中提取基因组总DNA。疏水膜离心吸附柱可高效、专一吸附DNA，最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA可以用于下游酶切、PCR及qPCR等实验。 | 该产品用于日立制全自动生化分析仪，用于体外定量测定血清或血浆中的乳酸脱氢酶。 |
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| 产品说明 | 本公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒，提取的DNA片段大、产量高、纯度好、稳定可靠，省时，避免使用苯酚、氯仿等有机溶剂特点。提取的DNA可用于PCR扩增、文库构建、Southern杂交、限制性酶切等分子生物学实验。1ml全血可提取约20~30ug的基因组DNA。 | |
| 用途 | 该产品用于日立制全自动生化分析仪，用于体外定量测定血清或血浆中的乳酸脱氢酶。 | |
| 结构及其组成 | (1) 底物缓冲液：L-乳酸，防腐剂：叠氮化钠；(2) NAD溶液：氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。产品有效期：2～10℃保存，制造后12个月。附件：注册产品标准，产品说明书。 | |
| 使用方法 | 一、小体积全血操作步骤如下： <400ul全血，以300ul血液处理量为例 1、向300ul抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，12000rpm离心1分钟，弃掉上清。 2、再重复步骤1一次，弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）。 4、加入150ul混合液，用移液器吹打均匀，60℃水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA，12000prm离心1分钟，弃掉上清。 6、加入800ul 75%酒精，颠倒数次；12000prm离心1分钟，用移液器吸掉上清，室温干燥10~15分钟。 7、加入150ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。 二、中量全血操作步骤如下： 1~10ml血量，以3ml血液处理量为例 1、向3ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，3000rpm离心5分钟，弃掉上清。 2、再重复步骤1一次，弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）。 4、加入1.5ml混合液，用1ml移液器或者一次性塑料吸管吹打均匀，60℃水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA。 6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，颠倒数次，12000prm离心3分钟，弃掉上清，室温干燥10~15分钟。 7、加入500ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。 三、大量全血操作步骤如下： 10~20ml血量，以10ml血液处理量为例 1、向10ml抗凝剂的血液中加入2.5倍体积的Solution A，颠倒混匀，8000rpm离心5分钟，弃掉上清； 2、再重复步骤1一次，弃掉上清。 3、按照第3页附表配制Solution B与Solution C的混合液（Solution B与Solution C的使用量见附表）； 4、加入5ml混合液，用一次性塑料吸管吹打均匀，60°C水浴或孵箱孵育10分钟，孵育期间颠倒混匀一次，溶液由红色变为黄绿色或棕色。 5、加入等体积的异丙醇，充分颠倒混匀至出现丝状或絮状基因组DNA； 6、用移液器将絮状物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，颠倒数次，12000prm离心1分钟，弃掉上清，室温干燥10~15分钟； 7、加入1000ul Elution buffer，60℃孵育10~15分钟或过夜溶解DNA，用移液器或一次性塑料吸管吹打均匀，-20℃保存基因组DNA。 |
一、 测定准备 1. 准备好待测样品(例如细胞裂解样品等)，置于冰槽里 2. 设定好分光光度仪(温度为25℃)：波长340nm，时延5秒，间隔30秒，读数6次(共3分钟)，并置 零或设置0分钟和1分钟各测读1次 二、 背景对照测定 3. 移取 微升GENMED缓冲液(Reagent A)到新的比色皿 4. 加入 微升GENMED阴性液(Reagent D) 5. 加入 微升GENMED反应液(Reagent B) 6. 上下倾倒数次，混匀 7. 在25℃温度下孵育5分钟 8. 放进分光光度仪，置零 9. 取出比色皿，加入 微升GENMED底色液(Reagent C) 10.上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内) 11.即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照(0分钟读数-1分钟读数)，正常读数差值为0.001至0.005 三、 样品测定 12.移取 微升GENMED缓冲液(Reagent A)到新的比色皿 13.加入20微升待测样品(20微克蛋白)(注意：样品须清澈，且pH为7.5) 14.加入 微升GENMED反应液(Reagent B) 15.上下倾倒数次，混匀 16.在25℃温度下孵育5分钟 17.放进分光光度仪，置零 18.取出比色皿，加入 微升GENMED底色液(Reagent C) 19.上下倾倒数次，混匀(限定在3秒之内) 20.即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数(0分钟读数-1分钟读数)，通常活性读数差值为正数 21.(选择步骤)重复实验步骤12至20，测读新的样品 四、 计算样品活性 |
| 产品特点 | ||
| 注意事项 | 1、冻存的全血避免在孵箱加热融化，否则会导致DNA产量下降，甚至提不出DNA；应在室温或者在4℃逐渐融化。 2、血液标本的保存及抗凝剂的选择： （1）短期保存：-20℃可保存6个月；长期保存：-70℃可保存一年以上。 （2）抗凝剂的选择：推荐使用EDTA和ACD作为抗凝剂。不建议使用肝素抗凝，因提出的DNA中含有肝素，会影响后续的PCR扩增；再者冻存的肝素抗凝血，Elution buffer不容易溶解DNA。 3、推荐使用尖底塑料离心管（请勿使用10ml玻璃离心管，因离心力较大，容易破碎）； 4、所有的离心操作均可在室温下完成。 5、需要操作者提供异丙醇、75%酒精。 6、提取的基因组DNA分光光度计测定260/280比值在1.7~2.0左右。 |
1. 本产品为20次(比色皿)和80次(酶标板)操作，包括背景对照 2. 操作时，须戴手套 3. 系统操作过程中，背景测定只需1次 4. 样品须澄清，至关重要(本公司提供GENMED细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒GMS30002.1) 5. 加样后3秒内比色测定 6. 反应1分钟后比色测定值趋于稳定;测定值由高到低变化;测定可持续3分钟 7. 比色测定后，比色皿须清洗彻底 8. 背景空对照0分钟读数通常0.2至0.8为理想状态 9. 背景空对照的正常读数差值(0分钟-1分钟)通常为0.001至0.005(正负即可) 10.样品0分钟读数通常和背景空对照0分钟读数一致 11.样本测定1分钟读数低于0分钟读数表明具有酶活性 12.建议待测样本蛋白浓度为20微克/20微升;如果样本酶活性过低或过高，即1分钟读数不变或为零， 则可以增加或降低样本量(本公司提供 GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1) 13.如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度 14.乳酸脱氢酶单位活性定义为：在25℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够转化1微摩尔丙酮酸至乳酸所 需的酶量作为一个活性单位 15.本公司提供系列细胞酶学检测试剂产品 |
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